骨組織を標的としたベクターとしてのヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体

专利摘要:
本発明は、一般式（Ｉ）で表されるヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体または上記誘導体の薬学上許容される塩と、その製造方法、およびその治療または診断の使用にも関する：（上記式中、 ‐ｎおよびｍは、互いに独立して、１〜４を範囲とする整数を表し、 ‐Ｘは酸素原子またはＮ‐Ｒ３基を表し、 ‐Ｒ１およびＲ３は、互いに独立して、直鎖状または分岐状Ｃ１‐Ｃ６アルキル基を表し、並びに ‐Ｒ２は治療または診断に関係する分子の残基を表す）。
公开号:JP2011508757A
申请号:JP2010541066
申请日:2009-01-05
公开日:2011-03-17
发明作者:ジャック、ルブルトン；ドミニク、エイマン；フランソワーズ、レディニ；マキシム、エゴロフ；マルク、パドラヌ；モニク、マテ；ヤニク、フォルタン
申请人:アンスティテュ、ナショナル、ド、ラ、サント、エ、ド、ラ、ルシェルシュ、メディカル（アンセルム）Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｄｅ Ｌａ Ｓａｎｔｅ Ｅｔ Ｄｅ Ｌａ Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ Ｍｅｄｉｃａｌ （Ｉｎｓｅｒｍ）；サントル、ナショナール、ド、ラ、ルシェルシュ、シアンティフィク、（セーエヌエルエス）；シュ、ナントＣｈｕ Ｎａｎｔｅｓ；ユニベルシテ ドゥ ナント；
IPC主号:C07F9-00

专利说明:

[0001] 発明の分野
本発明は、新規ヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体と、骨組織とを標的としたベクターとしての、それらの使用に関する。]
[0002] 背景技術
骨組織は、ヒドロキシアパタイト（Ｃａ１０（ＰＯ４）６（ＯＨ）２）結晶の形態によるリン酸カルシウムからなる鉱質フラクションと、細胞外マトリックスおよび特殊な細胞を含む有機フラクションとからなる結合組織である。]
[0003] 骨組織は、骨リモデリングと称される工程により恒久的に再組織化される。それは、新たな有機マトリックスを合成してその鉱質化を誘導する骨芽細胞の活性による付加成長期（Owen et al.,Curr.Opin.Nephrol.Hypertens.,1998,7,363）と、有機マトリックスを吸収してその鉱質部分を溶かす破骨細胞による分解期（Roodman et al.,Endocr.Rev.,1996,17,308）とにより特徴づけられる。この生理学的工程は、リンカルシウムホメオスタシスおよび骨量を維持して（Manologas et al.,Endocrin.Rev.,2000,21,115）、機械的応力に順応するようにさせる。この均衡のいかなる乱れも、骨大理石病のような骨凝縮病態、または最も多くは、骨粗鬆症のような代謝病態の場合ではなく、腫瘍源（骨肉腫などの原発腫瘍、または骨転移などの二次腫瘍）であることがある溶骨病態の発生と関連する。]
[0004] ビスホスホネート類（ヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体が属する、塩基形態のビスホスホン酸誘導体）は、内因性ピロホスフェート類の合成アナログであり、そこではＰ‐Ｏ‐Ｐ鎖がＰ‐Ｃ‐Ｐ鎖により置き換えられており、溶骨の有効な治療手段を表す代謝上安定な化合物へと至る（Heymann et al.,TrendsMol.Med.,2004,10,337）。]
[0005] これらの分子は、何よりもまず、骨組織を標的とするそれらの能力のために用いられた。ピロホスフェート類と同様に、ビスホスホネート類は骨の鉱質部分に強い親和性（リン酸基と骨の鉱質部分のカルシウムとの親和性）を有し、強い用量で石灰化工程を変調させうる。このような物質の利益は、骨代謝の様々な機能不全を治療する上で証明されてきた。ビスホスホネート類は、一方で高カルシウム血症、他方で痛みおよび骨折起源の骨疾患へ至る、過度な骨吸収に伴う病態を治療するために特に用いられる。]
[0006] このように、それらの使用は、骨粗鬆症、腫瘍源、またはそれ以外の高カルシウム血症と、腫瘍溶骨病態、例えば多発性骨髄腫または前立腺の二次骨転移または乳癌とを治療する上で、約１０年前から不可欠になってきた。]
[0007] 今日までに展開された構造‐活性研究においては、骨吸収を阻害するためのビスホスホネート類の能力が以下の二つの構造要因に依存することが明確に示された：
‐該化合物と骨の鉱質部分との良好な親和性のために不可欠なホスホネート基（およびヒドロキシ‐ビスホスホネート類の場合にはヒドロキシ基）、
‐分子に関連した生物学的活性を決める、分子標的に特異的な側鎖Ｒ。]
[0008] 従って、本発明は下記一般式（Ｉ）で表されるヒドロキシ‐ビスホスホン酸の新規誘導体またはその薬学上許容される塩に関する：



（上記式中、
‐ｎおよびｍは、互いに独立して、１〜４を範囲とする整数を表し、
‐Ｘは酸素原子またはＮ‐Ｒ３基を表し、
‐Ｒ１およびＲ３は、互いに独立して、直鎖状または分岐状Ｃ１‐Ｃ６アルキル基を表し、並びに
‐Ｒ２は治療または診断に関係する分子の残基を表す）。]
[0009] 従って、本発明の分子は下記三つの別々な部分からなる：
・骨の鉱質部分に対する官能基の強い親和性により、該分子に骨組織を標的とするヒドロキシ‐ビスホスホン酸官能基に相当する部分Ｃ、
・残基Ｒ２がグラフト化されてもよい、スペーサーアームである部分Ｂ、および最後に
・特に、骨組織の病態の標的治療または更には特にこの骨組織の画像化による診断を可能にする、治療または診断活性のある分子の残基Ｒ２に相当する部分Ａ。]
図面の簡単な説明

[0010] 図１は、腫瘍細胞の注入後本発明の「単純化分子」１および２で処置されたまたはされていないマウスの生存率、vs これら細胞の注入後の日数を表す。
図２は、未処置（コントロール）の、あるいは分子４またはゾレドロン酸の二ナトリウム塩で処置された、処置の４週間後におけるマウスのＸ線写真を示す。
図３は、骨端部（白矢印）における骨塩密度の増加で特徴づけられる骨退化の阻害効果を証明する、未処置（コントロール）のまたは分子（IV）で処置されたマウスのＸ線写真を示す。この効果は骨鉱質フラクションに対する分子（IV）の指向性を証明する。
図４は、分子（IV）またはイホスファミド（対照化学療法分子）でＤ７に処置されたまたはそれなしの場合における、腫瘍の大きさvs.時間の変化について表す。菱形はコントロール（即ち、処置の不在）を表し、四角は２３０μｍｏｌ／ｋｇで用いられたイホスファミドで得られる結果を表し、三角は１１５μｍｏｌ／ｋｇで用いられた化合物（IV）で得られる結果を表す。
図５は、分子（II）の放出スペクトルを表す。] 図１ 図２ 図３ 図４ 図５
発明の具体的説明

[0011] 「治療または診断に関係する分子の残基」とは、本発明の意味において、治療または診断に関係する分子がスペーサーアームにグラフト化されていることを意味する。このように、治療または診断に関係する分子は、スペーサーアームとのカップリング、即ちＸＨ基（‐ＯＨまたは‐ＮＨＲ３）とのカップリングを可能にする官能基を含んでなる。好ましくは、この官能基はハロゲン原子または‐Ｚ（Ｏ）Ｒ４基から選択され、ここでＺはＣ、ＰＲ５、またはＳＯを表し、Ｒ４はハロゲン原子またはＯＨ、Ｎ３、またはＯＣ（Ｏ）Ｒ６基を表し、Ｒ５は水素原子またはＯＲ７またはＲ７基を表し、Ｒ６は直鎖状または分岐状Ｃ１‐Ｃ６アルキル基を表し、およびＲ７は水素原子または直鎖状または分岐状Ｃ１‐Ｃ６アルキル基を表す。この官能基は、酸性特徴の官能基（フェノール、スルホンアミド、スクシンイミド、およびアナログ）、求電子性官能基〔イソ（チオ）シアネート類、アルデヒド類、または更にケトン類〕、または更にミカエル型のアクセプター系、例えばアクリレート類からも選択される。]
[0012] 活性成分を長期デリバリーさせるかまたは診断を行うために、スペーサーアームの長さで操作し、特にｍおよびｎの値で操作することで、分子の活性部分（残基Ｒ２）の速い放出を促すか、または対照的にこの活性部分の持続性を確保することが可能となるであろう。]
[0013] 他方、スペーサーアームとのカップリングを行うために用いられる治療または診断に関係する分子の官能基に応じて、安定な結合が部分Ａと分子の残部との間で得られるが、これは診断向け分子の範囲内で特に興味深いかもしれない。この場合に、官能基は、有利には、先に定義されたような、酸性特徴の官能基、求電子性官能基、およびミカエル型アクセプター系から選択される。]
[0014] 「アルキル」基とは、１‐６炭素原子を含む直鎖状または分岐状飽和炭化水素鎖、例えばメチル、エチル、イソプロピル、tert‐ブチル、ペンチル基などを意味する。]
[0015] 「ハロゲン原子」とは、フッ素、臭素、塩素、またはヨウ素原子を意味する。]
[0016] 「薬学上許容される塩」とは、特に薬学上許容される酸または塩基から得られる塩を意味する。]
[0017] 薬学上許容される酸の中では、限定されないが、無機酸、例えばハロゲン化水素酸、例えば塩酸および臭化水素酸、硫酸、硝酸または更にリン酸、あるいは有機酸、例えば酢酸、プロピオン酸、安息香酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ｐ‐トルエンスルホン酸、サイクラミン酸、サリチル酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、または更にパルミチン酸が挙げられる。]
[0018] 薬学上許容される塩基の中では、限定されないが、例えばアンモニウム塩、もしくはアルカリまたはアルカリ土類金属、例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウムまたは更にカルシウムの塩を形成する無機塩基、あるいは有機塩基、例えばトリエチルアミン、ジイソプロピルアミン、ピペリジン、または更にモルホリンが挙げられる。]
[0019] 有利には、Ｒ１はメチル基を表す。しかも、基Ｒ３が存在する場合、後者は特にメチル基を表す。]
[0020] ｎは１、２、３、または４、特に３を表す。]
[0021] 特に、本発明のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体の残基Ｒ２は、蛍光分子の残基、例えば（５‐ジメチルアミノ）ナフタレン‐１‐スルホニル（ダンシル基）残基、７‐ニトロ‐１，２，３‐ベンゾオキサジアゾール（ＮＢＤ基）残基、またはフルオレセイン、または更に発光分子、例えばジオキセタン誘導体から選択される。相当するヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体は、特に診断目的で、骨組織の画像化に用いられる。]
[0022] しかも、残基Ｒ２は、溶骨または骨凝縮骨リモデリングの病態、例えば原始骨腫瘍（例えば、骨肉腫、軟骨肉腫）、巨細胞腫またはユーイング肉腫、骨転移、多発性骨髄腫、リン‐カルシウム代謝の脱調節、例えば高カルシウム血症、骨粗鬆症、および炎症病態、例えばリウマチ様関節炎または周囲プロテーゼ弛緩の治療または診断に有用な活性成分の残基でもよい。]
[0023] 特に、残基Ｒ２は、標準化学療法剤、例えばイホスファミド、シスプラチナム、またはドキソルビシンの誘導体、抗炎症剤、例えばコルチコステロイド、例えばデキサメタゾン、または非ステロイド系抗炎症剤、例えばイブプロフェンまたはインドメタシン、および骨前形成または抗吸収活性のあるペプチドから選択される活性成分の残基から選択してもよい。]
[0024] 残基Ｒ２は、特に、アルキル化抗癌分子、例えばマスタードガスのアナログ、抗新生物分子、例えばドキソルビシン、シスプラチナム、アドリアマイシン、アクチノマイシン、フルオロウラシル、メトトレキサート、エトポシド、ビンクリスチン、ブスルファン、ドセタキセル、５‐フルオロウラシル、およびそれらの誘導体、抗炎症剤、例えばイブプロフェン、インドメタシン、ビンダザック、エトドリン酸、ロナゾラク、およびそれらの誘導体、ステロイド、例えばエストラジオール、エストロン、およびデキサメタゾンの誘導体から選択される治療関係の分子から派生してもよい。]
[0025] 残基Ｒ２は、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、シアニン誘導体、例えばフルオレスシアニン類およびガロシアニン、アルカリ、またはアルカリ土類スルフィド類およびダンシルから選択される診断関係の分子からも派生しうる。]
[0026] 更に詳しくは診断向けの、本発明のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体の例は、このため下記式（II）で表される：



該式は：
‐ｎ＝３、
‐ｍ＝１、
‐Ｘ＝ＮＭｅ、
‐Ｒ１＝Ｍｅ、および
‐Ｒ２＝



（フルオレセインの場合はダンシル基）
である前記式（Ｉ）に相当する。]
[0027] 更に詳しくは治療向けの、本発明のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体の例は以下である：



（潜在的アルキル化抗腫瘍分子：悪性高カルシウム血症、原始骨腫瘍、および骨転移へ考えられる適用症）、



（潜在的アルキル化抗腫瘍分子：悪性高カルシウム血症、原始骨腫瘍、および骨転移へ考えられる適用症）、



〔抗炎症官能基のある分子、適用症：リウマチ様関節炎、インドメタシン（非ステロイド系抗炎症剤、ＮＳＡＩ）から製造される〕、並びに



（ホルモン／エストロゲン官能基のある分子、適用症：骨粗鬆症、エストラジオール誘導体から製造される）。]
[0028] 本発明は、特に標的骨組織に向けた、薬剤としてまたは診断剤としてその使用のための、上記ヒドロキシ‐ビスホスホン酸の誘導体またはその薬学上許容される塩にも関する。]
[0029] 本発明は、骨組織を標的とした医薬または診断用組成物を製造するための、本発明のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体またはその薬学上許容される塩の使用にも関する。]
[0030] 特に、本発明のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体は骨組織の画像化のために、あるいは溶骨または骨凝縮骨リモデリングの病態、例えば原始骨腫瘍（例えば、骨肉腫、軟骨肉腫、巨細胞腫またはユーイング肉腫）、骨転移、多発性骨髄腫、リン‐カルシウム代謝の脱調節、例えば高カルシウム血症、骨粗鬆症、および炎症病態、例えばリウマチ様関節炎または周囲プロテーゼ弛緩を治療または診断するために用いられる。]
[0031] 第一の態様によると、ヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体は骨組織を画像化するために用いられる。]
[0032] 第二の態様によると、ヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体は、抗腫瘍治療において、特に悪性高カルシウム血症、原始骨腫瘍、および骨転移を治療するために用いられる。]
[0033] 第三の態様によると、ヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体は、骨粗鬆症の治療または抗炎症治療において、特にリウマチ様関節炎を治療するために用いられる。]
[0034] 具体的な態様において、Ｒ２基の放出性を確保するために、および骨組織でその作用を可能にするために、ｍ＝１およびＸ＝０が選択される。]
[0035] 他の具体的な態様において、ｍ≧２がＲ２基の持続性を確保するために選択され、後者が分子の残部でより安定的に結合されることにより、骨組織の画像化で可能な使用をなしうる。]
[0036] 本発明は更に、先に記載されたような、本発明の少なくとも一種のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体またはその薬学上許容される塩と、少なくとも一種の薬学上許容される担体とを含んでなる、医薬または診断用組成物に関する。]
[0037] この組成物は、特に皮下、静脈内、経口、筋肉内、または経皮経路により、即ち、好ましくは注射溶液としてまたはパッチとして、その投与を行えるように処方される。]
[0038] 本発明の目的は、薬剤としてまたは診断剤としてその使用のための、先に定義されたような医薬または診断用組成物でもある。]
[0039] 特に、本発明の組成物は、骨組織の画像化のために、あるいは溶骨または骨凝縮骨リモデリングの病態、例えば原始骨腫瘍、例えば骨肉腫、軟骨肉腫、巨細胞腫またはユーイング肉腫、骨転移、多発性骨髄腫、リン‐カルシウム代謝の脱調節、例えば高カルシウム血症、骨粗鬆症、および炎症病態、例えばリウマチ様関節炎または周囲プロテーゼ弛緩を治療または診断するために用いられる。]
[0040] 第一の態様によると、診断用組成物は骨組織を画像化するために用いられる。]
[0041] 第二の態様によると、治療用組成物は抗腫瘍治療で、特に悪性高カルシウム血症、原始骨腫瘍、および骨転移を治療するために用いられる。]
[0042] 第三の態様によると、治療用組成物は骨粗鬆症の治療で、または抗炎症治療で、特にリウマチ様関節炎を治療するために用いられる。]
[0043] 本発明の化合物は、下記の連続工程に従い製造される：
（ａ）下記式（Ｂ）の化合物：



（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、ｎ、ｍ、およびＡｌｋは先に定義された通りである）を得るために、下記式（Ａ）の化合物：



（上記式中、Ｒ１、Ｘ、ｎ、およびｍは先に定義された通りであり、Ａｌｋは直鎖状または分岐状Ｃ１‐Ｃ６アルキル基、特にtert‐ブチル基を表す）と、残基Ｒ２に相当する治療または診断に関係する分子とのカップリング、
（ｂ）下記式（Ｃ）の化合物：



（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、ｎ、およびｍは先に定義された通りである）とを得るために、前工程（ａ）で得られた式（Ｂ）の化合物の末端エステルのケン化、
（ｃ）式（Ｉ）の化合物を得るために、前工程で得られた式（Ｃ）の化合物の遊離カルボン酸官能基からヒドロキシ‐ビスホスホン酸官能基への変換、
（ｄ）場合により、後者の薬学上許容される塩を得るために、前工程（ｃ）で得られた式（Ｉ）の化合物の塩化、並びに
（ｅ）前工程（ｃ）または（ｄ）で得られた式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の一種の反応媒体からの分離。]
[0044] 工程（ａ）：
このカップリング工程は、当業者に周知の技術により、式（Ａ）の化合物のＸＨ（即ち、ＯＨまたはＯＨＲ３）官能基と、先に定義された治療または診断に関係する分子の官能基との間で行われる。]
[0045] これは、とりわけ、特に治療または診断に関係するハロゲン化、特に塩素化または臭素化された分子と、式（Ａ）の化合物のＸＨ官能基との間における、求核置換である。このような反応は、有利には、ＮａＨＣＯ３または更にＮａＨＭＤＳ（ヘキサメチルジシラザンナトリウム）の塩基の存在下において行われてもよい。]
[0046] これは、治療または診断に関係する分子により有されるカルボン酸官能基と、式（Ａ）の化合物により有される官能基ＸＨとのペプチドカップリングでもよい。このような反応は、有利には、場合によりカップリング補助剤と一緒に、カップリング剤の存在下において行われてもよい。]
[0047] カップリング剤としては、特に、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１‐（３‐ジメチルアミノプロピル）‐３‐エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、２‐（Ｈ‐ベンゾトリアゾール‐１‐イル）‐１，１，３，３‐テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、２‐（１Ｈ‐ベンゾトリアゾール‐１‐イル）‐１，１，３，３‐テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、またはＯ‐（７‐アゾベンゾトリアゾール‐１‐イル）‐１，１，３，３‐テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）がある。]
[0048] カップリング補助剤は、特に、Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、Ｎ‐ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）、３，４‐ジヒドロ‐３‐ヒドロキシ‐４‐オキソ‐１，２，３‐ベンゾトリアゾール（ＨＯＯＢｔ）、１‐ヒドロキシ‐７‐アザベンゾトリアゾール（ＨＯＡｔ）、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、またはＮ‐ヒドロキシスルホスクシンイミド（スルホＮＨＳ）から選択される。]
[0049] 工程（ｂ）：
この工程は、トリフルオロ酢酸、ギ酸、酢酸、塩酸、硫酸などの酸の存在下において、特にトリフルオロ酢酸と行われる。]
[0050] 工程（ｃ）：
この工程は当業者に周知の技術により行われる。]
[0051] それは、特に、カテコールボランのようなボランの作用によりボロネート誘導体の形で化合物（Ｃ）のカルボン酸官能基の活性化により、次いでトリス（トリメチルシリル）ホスファイトとアルブゾフ条件下の反応により、その後でメタノールのような脂肪族アルコールとの処理により行われる。]
[0052] 「脂肪族アルコール」とは、有利には１〜６、好ましくは１〜４の炭素原子を含む、直鎖状または分岐状の飽和または不飽和炭化水素鎖に、アルコール官能基ＯＨを含んだ化合物を意味する。]
[0053] 工程（ｄ）：
ケン化工程は、先に定義されたような薬学上許容される酸または塩基の存在下において行われる。]
[0054] 工程（ｅ）：
こうして得られた式（Ｉ）の化合物は、当業者に周知の方法により、例えば抽出、溶媒の蒸発により、または更に沈殿および濾過により、反応媒体から分離されてもよい。]
[0055] 更に、この化合物は、必要であれば当業者に周知の技術により、例えば化合物が結晶であれば再結晶化により、シリカゲルでカラムクロマトグラフィーにより、または更には高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により精製される。]
[0056] 出発試薬として用いられる式（Ａ）の化合物は、当業者に周知の技術により製造される。]
[0057] それは、特に下記連続工程に従い製造される：
（ａ１）下記式（Ｆ）の化合物：



（上記式中、ｎ、ｍ、およびＨａｌは先に定義された通りである）を得るために、下記式（Ｄ）の化合物：



（上記式中、ｍは先に定義された通りである）と、下記式（Ｅ）の分子：



（上記式中、ｎは先に定義された通りであり、Ｈａｌはハロゲン原子、特に臭素を表す）との反応、
（ｂ１）下記式（Ａ１）の化合物：



（上記式中、ｎ、ｍ、Ｒ１、およびＡｌｋは先に定義された通りである）を得るために、前工程（ａ１）で得られた式（Ｆ）の化合物と、下記式（Ｇ）の化合物：



（上記式中、Ｒ１およびＡｌｋは先に定義された通りである）との反応、および
（ｃ１）場合により、下記式（Ａ２）の化合物：



（上記式中、ｎ、ｍ、Ｒ１、Ｒ３、およびＡｌｋは先に定義された通りである）を得るために、前工程（ｂ１）で得られた式（Ａ１）の化合物の遊離ＯＨ官能基のアミノ化。]
[0058] 工程（ａ１）：
このカップリング反応は、有利には、Ｋ２ＣＯ３などの塩基の存在下で行われる。]
[0059] 出発製品（（Ｄ）および（Ｅ））は市販品であるか、または当業者に周知の技術により製造される。]
[0060] 工程（ｂ１）：
この工程も、有利には、Ｋ２ＣＯ３などの塩基の存在下において行われる。]
[0061] 試薬（Ｇ）は、下記実施例で説明されている、当業者に周知の方法により容易に合成される。]
[0062] 工程（ｃ１）：
この任意工程においては、Ｘ＝ＮＲ３の式（Ａ）の化合物を入手することが可能である。]
[0063] この工程は、当業者に周知の操作に従い行われる。]
[0064] このように、遊離ＯＨ基は（特に、トリエチルアミンのような塩基の存在下で塩化メシルの作用により）メシレートのような脱離基へ変換されてもよく、次いでこの脱離基がアミンＲ３ＮＨ２で置換される。]
[0065] 用いられる頭字語：
ＤＣＭジクロロメタン
ＤＭＦジメチルホルムアミド
ｅｑ．当量
ＨＭＤＳヘキサメチルシラザン
ＨＲＭＳ高分解能質量スペクトル
ｐｐｍ 部／百万
ＰＴＳＡパラ‐トルエンスルホン酸
ＮＭＲ核磁気共鳴
ＲＴ室温
ＴＥＡトリエチルアミン
ＴＨＦ テトラヒドロフラン]
[0066] １．分子の合成
１．１．式（II）の分子の合成
式（II）の分子の合成は、下記反応スキームに従い、３‐ヒドロキシベンズアルデヒドおよびＮ‐メチル‐３‐アミノプロパン酸tert‐ブチルから８工程により行った：]
[0067] ３‐（ヒドロキシ）ベンジルアルコール：



冷水で反応混合液を冷やしながら、ＮａＢＨ４（７７５ｍｇ，２０．５ｍｍｏｌ）をＥｔＯＨ（２５ｍＬ）中３‐ヒドロキシベンズアルデヒド（５ｇ，４０．９ｍｍｏｌ）の溶液へ徐々に加える。この混合液を同温度で５〜１０分間攪拌する。次いで、ジクロロメタン（ＤＣＭ）（１００ｍＬ）、その後２ＭＨＣｌ水溶液（ｐＨ〜３まで）を加える。有機相を分離し、最終生成物を１：３の割合のＥｔＯＨ／ＤＣＭ混合液で水相から４回抽出する。集められた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。減圧下で溶媒の蒸発後、粘稠無色油状物（４．９ｇ，９７％）を得るが、これは徐々に結晶化する。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．１３（１Ｈ，ｔ，３Ｊ＝９Ｈｚ）；６．９０‐６．７２（２Ｈ，ｍ）；６．７１‐６．６０（１Ｈ，ｍ）；４．８３（２Ｈ，ｓ）；４．５３（２Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１５８．６５；１４４．３７；１３０．４９；１１９．２２；１１５．２６；１１４．９０；６５．２９．]
[0068] 〔３‐（３‐ブロモプロポキシ）フェニル〕メタノール：



予め６５℃で５分間攪拌されたジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３０ｍＬ）中Ｋ２ＣＯ３（３．２ｇ，２３ｍｍｏｌ）および３‐（ヒドロキシメチル）フェノール（５ｇ，４０．３ｍｍｏｌ）の懸濁液へ１，３‐ジブロモプロパン（２３ｍＬ，０．２２ｍｏｌ）を徐々に加える。反応媒体を同温度で４５分間にわたり攪拌下で維持する。室温（ＲＴ）へ冷却後、Ｅｔ２Ｏ（１５０ｍＬ）を加え、有機相を飽和ＮａＣｌ水溶液で４回抽出する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。減圧下で溶媒の蒸発後、粘稠無色油状物（６．７ｇ，６８％）を得るが、これは徐々に結晶化する。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．２２（１Ｈ，ｔ，３Ｊ＝９Ｈｚ）；６．９４‐６．８３（２Ｈ，ｍ）；６．８２‐６．７３（１Ｈ，ｄｄ，３Ｊ＝９Ｈｚ，３Ｊ＝３Ｈｚ）；４．５８（２Ｈ，ｓ）；４．０５（２Ｈ，ｔ，３Ｊ＝６Ｈｚ）；３．５６（２Ｈ，ｔ，３Ｊ＝６Ｈｚ）；２．４６（１Ｈ，ｂｒ，ｓ）；２．２７（２Ｈ，ｑ，３Ｊ＝６Ｈｚ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１５９．００；１４２．７４；１２９．６８；１１９．４４；１１３．８２；１１３．０１；６５．４１；６５．０５；３２．４６；３０．１７．]
[0069] ３‐（メチルアミノ）プロパン酸tert‐ブチル：



ＤＭＦ（４０ｍＬ）、メチルアンモニウムクロリド（４．９ｇ，７２ｍｍｏｌ）、および１，８‐ジアザビシクロ〔５．４．０〕ウンデカ‐７‐エン（ＤＢＵ）（２１ｍＬ，１４４ｍｍｏｌ）から得られた均質溶液へ−４５℃でtert‐ブチルアクリレート（３．０８ｇ，３．５２ｍＬ，２４ｍｍｏｌ）を徐々に加える。反応媒体を−１０℃で２時間３０分にわたり攪拌下で維持する。次いでＥｔ２Ｏ（２００ｍＬ）を加え、反応混合液を飽和ＮａＣｌ水溶液で４回抽出する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。減圧下３０℃で溶媒の蒸発後、無色油状物を得る（３．６ｇ，９４％）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：２．７５（２Ｈ，ｔ，３Ｊ＝６Ｈｚ）；２．４２‐２．３２（５Ｈ，ｍ）；１．４０（９Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１７１．９７；８０．１８；４７．２４；３６．１６；３５．５７；２７．９９．]
[0070] ３‐〔〔３‐〔３‐（ヒドロキシメチル）フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸tert‐ブチル：



触媒量のＮａＩを含有したＤＭＦ（５０ｍＬ）中〔３‐（３‐ブロモプロポキシ）フェニル〕メタノール（１．８ｇ，７．３ｍｍｏｌ）および３‐（メチルアミノ）プロパン酸tert‐ブチル（１．７５ｇ，１１ｍｍｏｌ）の溶液へＲＴでＫ２ＣＯ３（１ｇ，７．３ｍｍｏｌ）を加える。この混合液をアルゴン下同温度で４８時間攪拌する。次いでＥｔ２Ｏ（２００ｍＬ）を加え、この溶液を飽和ＮａＣｌ水溶液で４回抽出する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。シリカでクロマトグラフィー（溶離液‐ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１）および減圧下３０℃で溶媒の蒸発後、無色油状物を得る（１．４６ｇ，６２％）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．１８（１Ｈ，ｔ，３Ｊ＝９Ｈｚ）；６．９３‐６．８０（２Ｈ，ｍ）；６．７９‐６．６８（１Ｈ，ｄｄ，３Ｊ＝９Ｈｚ，３Ｊ＝３Ｈｚ）；４．５７（２Ｈ，ｓ）；３．９２（２Ｈ，ｔ，３Ｊ＝６Ｈｚ）；３．２２（１Ｈ，ｂｒ ｓ）；２．６２（２Ｈ，ｔ，３Ｊ＝６Ｈｚ）；２．４５（２Ｈ，ｔ，３Ｊ＝６Ｈｚ）；２．３２（２Ｈ，ｔ，３Ｊ＝６Ｈｚ）；２．１７（３Ｈ，ｓ）；１．８６（２Ｈ，ｑ，３Ｊ＝６Ｈｚ）；１．３９（９Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１７２．１２；１５９．３０；１４３．０４；１２９．５２；１１９．０７；１１３．７４；１１２．９１；８０．５１；６６．１５；６４．９５；５４．０７；５２．９６；４１．９８；３３．６２；２８．２０；２７．１７．]
[0071] ３‐〔メチル〔３‐〔３‐〔（メチルアミノ）メチル〕フェノキシ〕プロピル〕アミノ〕プロパン酸tert‐ブチル：



ジクロロメタン（２０ｍＬ）中、３‐〔〔３‐〔３‐（ヒドロキシメチル）フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸tert‐ブチル（４６５ｍｇ，１．４４ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（ＴＥＡ）（１．４ｍＬ，１０ｍｍｏｌ）の溶液へ−７８℃でメタンスルホニルクロリド（ＭｓＣｌ）（０．５５５ｍＬ，７．２ｍｍｏｌ）を徐々に加える。この混合液をアルゴン下同温度で１時間３０分攪拌する。次いでメチルアミン（ジクロロメタン中０．６５Ｍ溶液，２２ｍＬ，１４．３ｍｍｏｌ）を加える。混合液を室温へ戻し、この温度で更に１時間攪拌する。得られた混合液をＮａＣｌとＮａＨＣＯ３の混合水溶液で４回抽出する。有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥させる。減圧下で溶媒の蒸発後、最終粗生成物を無色油状物（４５５ｍｇ，９４％）として得るが、これは次の工程でいかなる追加精製もなく用いられる。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．３０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ）；７．１１（１Ｈ，ｓ）；７．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；６．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；４．５５（２Ｈ，ｓ）；４．０７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ）；３．０‐２．８３（４Ｈ，ｍ）；２．６９（３Ｈ，ｓ）；２．６０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ）；２．５２（３Ｈ，ｓ）；２．１０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６Ｈｚ）；１．４０（９Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ ＮＭＲ ＤＥＰＴ‐１３５（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１３０．４９；１２４．３０；１１８．９２；１１６．５４；６６．１１；６１．０６；５３．８３；５２．６５；４１．５２；３９．５４；３２．８７；２８．０６；２６．３２．]
[0072] ３‐〔〔３‐〔３‐〔〔〔５‐（ジメチルアミノ）ナフタレン‐１‐イル〕（メチル）アミノ〕メチル〕フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸tert‐ブチル：



アセトニトリル（３５ｍＬ）中、粗３‐〔メチル〔３‐〔３‐〔（メチルアミノ）メチル〕フェノキシ〕プロピル〕アミノ〕プロパン酸tert‐ブチル（４５５ｍｇ，１．３５ｍｍｏｌ）および塩化ダンシル（３６４ｍｇ，１．３５ｍｍｏｌ）の溶液へＲＴで水中ＮａＨＣＯ３溶液（１３３ｍｇ，１．５８ｍｍｏｌ）を加える。この混合液をアルゴン下同温度で１時間３０分攪拌する。次いで溶媒を減圧下で蒸発させ、得られた油状物をシリカゲルでクロマトグラフィーにより精製する（溶離液‐ＤＣＭ、次いでＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１００：１の混合液）。最終生成物を蛍光淡緑色非晶ゴム状物として得る（５２２ｍｇ，６８％）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：８．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ）；８．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９Ｈｚ）；８．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；７．６５‐７．５０（２Ｈ，ｍ）；７．２８‐７．１５（２Ｈ，ｍ）；６．８７‐６．７０（３Ｈ，ｍ）；４．３２（２Ｈ，ｓ）；３．８７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ）；２．９２（６Ｈ，ｓ）；２．８０‐２．６３（５Ｈ，ｍ）；２．５５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ）；２．４３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ）；２．２９（３Ｈ，ｓ）；１．９３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６Ｈｚ）；１．４６（９Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１７２．０８；１５９．４７；１５１．９７；１３７．５２；１３４．０７；１３０．７２；１３０．４６；１３０．４２；１３０．２７；１２９．７０；１２８．２７；１２３．３７；１２０．７０；１１９．９１；１１５．３６；１１４．３８；１１４．１３；８０．５５；６６．０７；５４．１８；５３．６５；５３．１３；４５．６１；４２．０８；３３．９１；３３．７７；２８．２８；２７．２４．]
[0073] ３‐〔〔３‐〔３‐〔〔５‐（ジメチルアミノ）‐Ｎ‐メチルナフタレン‐１‐スルホンアミド〕メチル〕フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸：



ジクロロメタン（４ｍＬ）中、３‐〔〔３‐〔３‐〔〔〔５‐（ジメチルアミノ）ナフタレン‐１‐イル〕（メチル）アミノ〕メチル〕フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸tert‐ブチル（１００ｍｇ，０．１７５ｍｍｏｌ）の溶液へＲＴでトリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を加える。この混合液を同温度で４．５時間攪拌する。次いで溶媒を減圧下でジクロロメタンと共蒸発させ、得られた油状物をシリカゲルのカラムでクロマトグラフィーにより精製する（溶離液‐ＤＣＭ、次いで混合液ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝１０：１）。最終生成物を蛍光淡緑色非晶ゴム状物として得る（９０ｍｇ，９９％）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３‐ＭｅＯＤ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：８．６０‐８．４５（２Ｈ，ｍ）；８．１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；７．６５‐７．５０（２Ｈ，ｍ）；７．３７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；７．１２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ）；６．８０‐６．６５（３Ｈ，ｍ）；４．２５（２Ｈ，ｓ）；３．８７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ）；３．３５‐３．１０（４Ｈ，ｍ）；３．００（６Ｈ，ｓ）；２．８５‐２．７０（５Ｈ，ｍ）；２．６５（３Ｈ，ｓ）；２．１４（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３‐ＭｅＯＤ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１７２．２３；１５８．５１；１４８．２２；１３７．４５；１３４．２７；１３０．２８；１３０．１１；１２９．７７；１２９．４７；１２９．０２；１２８．０２；１２４．３２；１２１．８０；１２１．１８；１１６．３８；１１４．０３；１１３．９３；６４．４６；５４．３９；５３．４２；５１．８１；４５．７６；４０．１８；３３．９５；２８．８４；２３．８９．]
[0074] ３‐〔〔３‐〔３‐〔（５‐ジメチルアミノ）‐Ｎ‐メチルナフタレン‐１‐スルホンアミド〕メチル〕フェノキシ〕プロピル（メチル）アミノ〕‐１‐ヒドロプロパン‐１，１‐ジイルジホスホン酸（II）：



カテコールボランの溶液（ＴＨＦ中１Ｍ，１．０７ｍＬ，１．０７ｍｍｏｌ，６．１ｅｑ．）を乾燥条件下ＲＴでアルゴン下３‐〔〔３‐〔３‐〔〔５‐（ジメチルアミノ）‐Ｎ‐メチルナフタレン‐１‐スルホンアミド〕メチル〕フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸（９０ｍｇ，０．１７５ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）へ加えた。この混合液をガス発生（Ｈ２）の終了まで同温度で１時間攪拌する。次いでＰ（ＯＳｉＭｅ３）３（３７１ｍｇ，１．２４ｍｍｏｌ，７．１ｅｑ．）をそのまま加え、攪拌を１６時間維持した。メタノール（０．５ｍＬ）を加え、反応媒体を１時間攪拌し、次いでＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈する。白色沈殿物が生成する。それを濾過し、ＤＣＭで速やかにすすぎ、アルゴン下で乾燥させる。６０ｍｇの吸湿性蛍光白色粉末を得たが、これはシリカゲルカラムで精製される（シリカゲル１００ Ｃ１８‐逆相，溶離液Ｈ２Ｏ：ＭｅＯＨ）。
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ‐Ｐｙ‐ＤＭＳＯ‐ＭｅＯＤ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：８．３３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；８．１７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；８．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；７．６０‐７．４０（２Ｈ，ｍ）；７．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；７．０５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ）；６．７３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；６．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；６．５９（１Ｈ，ｓ）；４．１３（２Ｈ，ｓ）；３．７９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ）；３．３７（２Ｈ，ｍ）；２．７８（３Ｈ，ｓ）；２．６４（６Ｈ，ｓ）；２．５６（３Ｈ，ｓ）；２．５５‐２．２０（４Ｈ，ｍ）；２．０８（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１５８．２５；１５１．２６；１３７．１４；１３３．９３；１３０．０６（ｓｌ）；１２９．７４（ｓｌ）；１２９．３８；１２８．２０（ｓｌ）；１２６．５１（ｓｌ）；１２３．５３（ｓｌ）；１２０．５０（ｓｌ）；１１９．１７（ｓｌ）；１１５．１７（ｓｌ）；１１４．２４（ｓｌ）；１１３．８４（ｓｌ）；７２．１２（ｔ，Ｊ＝１３２Ｈｚ）；６４．８１；５３．５０；５３．０４；４４．７１；３９．２９；３８．７４；３３．６０；２８．０７；２３．６４．
３１Ｐ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ‐Ｐｙ‐ＤＭＳＯ‐ＭｅＯＤ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１６．
ＨＲＭＳ（ＥＳ）（ｍ／ｚ）：〔Ｍ＋Ｈ〕＋ Ｃ２７Ｈ３９Ｎ３Ｏ１０Ｐ２Ｓの計算値６６０．１９１０，実測値６６０．１９１１．]
[0075] １．２．式(III)の分子の合成
合成は分子３から行うが、その合成操作は後に記載されている（１．４．参照）。]
[0076] ３‐〔〔３‐〔３‐〔〔アミノ〔ビス（２‐クロロエチル）アミノ〕ホスホリルオキシ〕メチル〕フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸：



トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（２０ｍＬ）をＭｅＮＯ２（１６０ｍＬ）中分子３（１．０８ｇ，２．０５ｍｍｏｌ）の溶液へ加え、得られた溶液をＲＴで３０分間攪拌する。溶媒をＲＴで１０分間蒸発させ、４０℃で乾燥蒸発させ、次いでＤＣＭへ入れて痕跡量のＴＦＡを除去させる。残渣をシリカゲルカラムで速やかにクロマトグラフィー（４０ｃｍ３，ＤＣＭからＤＣＭ／ＭｅＯＨ（１：１）への勾配）に付して、無色油状物を得る（２６７ｍｇ，３３％）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．２９（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．０８‐６．８７（３Ｈ，ｍ），４．９６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），４．１４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），３．７０‐３．５５（４Ｈ，ｍ），３．５０‐３．３０（８Ｈ，ｍ），２．８９（３Ｈ，ｓ），２．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．２６（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１７７．６３；１６０．２４；１４０．１２（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ）；１３０．８８；１２１．４５；１１５．６１；１１４．８６；６８．０９（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ）；６６．３６；５５．２０；５５．０４；５０．８１（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ）；４３．２４；４０．３５；３１．２２；２５．５７．
３１Ｐ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：２０．
ＨＲＭＳ（ＥＳ）（ｍ／ｚ）：〔Ｍ＋Ｈ〕＋ Ｃ１８Ｈ３０Ｃｌ２Ｎ３Ｏ５Ｐの計算値４７０．１３７８，実測値４７０．１３７７．]
[0077] ３‐〔〔３‐〔３‐〔〔アミノ〔ビス（２‐クロロエチル）アミノ〕ホスホリルオキシ〕メチル〕フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕‐１‐ヒドロプロパン‐１，１‐ジイルジホスホン酸(III)：



分子（II）の合成（最終工程）に用いられたものと同様の操作を適用するが、但し６．５ｍＬのＴＨＦ中２３０ｍｇの３‐〔〔３‐〔３‐〔〔アミノ〔ビス（２‐クロロエチル）アミノ〕ホスホリルオキシ〕メチル〕フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸、５．１ｅｑ．ｍｏｌ．のカテコールボランおよび６．１ｅｑ．ｍｏｌ．のＰ（ＯＳｉＭｅ３）３の溶液を用いることによる。無色生成物を３２％の収率で単離する。
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．３６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．１１‐６．９２（３Ｈ，ｍ），４．９７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），４．１５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），３．７２‐３．５６（４Ｈ，ｍ），３．５６‐３．１０（８Ｈ，ｍ），２．８６（３Ｈ，ｓ），２．３３（２Ｈ，ｍ），２．２１（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１５８．１６；１３８．１０（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ）；１３０．１９；１２０．８２；１１５．００；１１３．９８；７２．１０（ｔ，１Ｊｃ‐ｐ＝１３０Ｈｚ）；６７．３１（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ）；６５．３５；５３．６２；５３．２９（ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ）；４７．９３（ｄ，Ｊ＝５Ｈｚ）；４２．０６；３９．５５；２７．９５；２３．６７．
３１Ｐ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：２０（１Ｐ），１８（２Ｐ）．
ＨＲＭＳ（ＥＳ）（ｍ／ｚ）：〔Ｍ＋Ｈ〕＋ Ｃ１８Ｈ３４Ｃｌ２Ｎ３Ｏ１０Ｐ３の計算値６３８．０７３４，実測値６３８．０７３３．]
[0078] １．３．式（IV）の分子の合成
２‐〔３‐（３‐ブロモプロポキシ）ベンジルオキシ〕エタノール：



エチレングリコール（１８０ｍＬ）中、３‐（ヒドロキシメチル）フェノール（８．８ｇ，７１ｍｍｏｌ）およびパラトルエンスルホン酸（ＰＴＳＡ）（２．３ｇ，１３．４ｍｍｏｌ）の溶液をアルゴン下で１３０℃へ４０時間加熱する。８０℃へ冷却後、Ｋ２ＣＯ３（１３ｇ，９４ｍｍｏｌ）、次いで１，３‐ジブロモプロパン（４２ｍＬ，３８６ｍｍｏｌ）を加える。この温度で２時間の攪拌後、反応液をＲＴに冷却し、ＤＣＭ‐Ｈ２Ｏ混合液で抽出する。次いで有機相を水で数回洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、真空下で濃縮する。最終粗生成物を黄色油状物（１４ｇ，２工程で６８％）として得、これを更なる精製なしに用いる。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．２８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．００‐６．９０（２Ｈ，ｍ），６．８５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，Ｊ＝７Ｈｚ），４．５４（２Ｈ，ｓ），４．１１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），３．７７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ），３．６８‐３．５２（４Ｈ，ｍ），２．６２（１Ｈ，ｂｒ ｓ），２．３２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１５８．９７；１３９．７３；１２９．６６；１２０．３６；１１３．９５；１１３．９２；７３．２０；７１．５６；６５．３５；６１．９１；３２．４６；３０．２１．]
[0079] ３‐〔〔３‐〔３‐〔（２‐ヒドロキシエトキシ）メチル〕フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸tert‐ブチル：



３‐〔〔３‐〔３‐（ヒドロキシメチル）フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸tert‐ブチルの製造について記載されたものと同様の操作を適用する。無色生成物を６８％の収率で単離する。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．２０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），６．９０‐６．８１（２Ｈ，ｍ），６．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，Ｊ＝７Ｈｚ），４．４８（２Ｈ，ｓ），３．９６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），３．７１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ），３．５４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ），２．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．５９（１Ｈ，ｂｒ ｓ），２．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．３５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．２１（３Ｈ，ｓ），１．９０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．４０（９Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１７２．１３；１５９．３２；１３９．６９；１２９．５４；１１９．９７；１１３．９７；１１３．８７；８０．４６；７３．２６；７１．５６；６６．１７；６１．９３；５４．１１；５３．１０；４２．０８；３３．７８；２８．２３；２７．２８．]
[0080] Ｎ‐〔３‐〔３‐〔６‐アミノ‐９‐クロロ‐７‐（２‐クロロエチル）‐６‐オキシド‐２，５‐ジオキサ‐７‐アザ‐６‐ホスファノン‐１‐イル〕フェノキシ〕プロピル〕‐Ｎ‐メチル‐β‐アラニン酸tert‐ブチル：



分子３の製造について記載されたものと同様の操作を適用する。無色生成物を６５％の収率で単離する。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．２０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），６．９１‐６．８１（２Ｈ，ｍ），６．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，Ｊ＝７Ｈｚ），４．４８（２Ｈ，ｓ），４．１９（１Ｈ，ｍ），４．０２（１Ｈ，ｍ），３．９５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），３．７０‐３．５０（６Ｈ，ｍ），３．９７‐３．２８（４Ｈ，ｍ），３．０６（２Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝３Ｈｚ），２．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．５０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．３５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．２１（３Ｈ，ｓ），１．９０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．３９（９Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１７２．０７；１５９．３４；１３９．２３；１２９．６５；１２０．０５；１１４．０５；１１４．０２；８０．４８；７３．２８；６９．５３（ｄ，Ｊ＝６Ｈｚ）；６６．１８；６４．７５（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ）；５４．１１；５３．１１；４９．６２；４９．５７；４２．６８；４２．０５；３３．７７；２８．２３；２７．２８．]
[0081] Ｎ‐〔３‐〔３‐〔６‐アミノ‐９‐クロロ‐７‐（２‐クロロエチル）‐６‐オキシド‐２，５‐ジオキサ‐７‐アザ‐６‐ホスファノン‐１‐イル〕フェノキシ〕プロピル〕‐Ｎ‐メチル‐β‐アラニン：



３‐〔〔３‐〔３‐〔〔アミノ〔ビス（２‐クロロエチル）アミノ〕ホスホリルオキシ〕メチル〕フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸の製造について記載されたものと同様の操作を適用する。無色生成物を７３％の収率で単離する。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．２６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝１Ｈｚ），７．０２‐６．９２（２Ｈ，ｍ），６．８９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３Ｈｚ，Ｊ＝７Ｈｚ），４．５４（２Ｈ，ｓ），４．６０‐４．０２（４Ｈ，ｍ），３．７７‐３．５６（６Ｈ，ｍ），３．５０‐３．３０（８Ｈ，ｍ），２．８９（３Ｈ，ｓ），２．５９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），２．２５（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１７７．５８；１６０．２２；１４１．２６；１３０．７３；１２１．８０；１１５．１８；１１５．１０；７４．１２；７０．７３（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ）；６６．２７；６６．０３（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ）；５５．１８；５４．９９；５０．８８；４３．２８；４０．４０；３１．２６；２５．５９．]
[0082] 〔３‐〔〔３‐〔３‐〔６‐アミノ‐９‐クロロ‐７‐（２‐クロロエチル）‐６‐オキシド‐２，５‐ジオキサ‐７‐アザ‐６‐ホスファノン‐１‐イル〕フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕‐１‐ヒドロキシプロパン‐１，１‐ジイル〕ジホスホン酸（IV）：



〔３‐〔〔３‐〔３‐〔〔アミノ〔ビス（２‐クロロエチル）アミノ〕ホスホリルオキシ〕メチル〕フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕‐１‐ヒドロキシプロパン‐１，１‐ジイル〕ビスホスホン酸の製造に用いられたものと同様の操作を適用する。無色生成物を４７％の収率で単離する。
１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．３８（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．１３‐６．９１（３Ｈ，ｍ），４．５９（２Ｈ，ｓ），４．３０‐４．００（４Ｈ，ｍ），３．７８（２Ｈ，ｍ），３．７２‐３．６０（４Ｈ，ｍ），３．６０‐３．２０（８Ｈ，ｍ），２．８８（３Ｈ，ｓ），２．３５（２Ｈ，ｍ），２．２４（２Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１５８．１３；１３９．１１；１３０．０７；１２１．４７；１１４．６３；７２．５８；７２．１１（ｔ，１ＪＣ‐Ｐ＝１３０Ｈｚ）；６９．００（ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ）；６５．３４；６４．８４（ｄ，Ｊ＝４Ｈｚ）；５３．６５；５３．３２（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ）；４７．９７；４７．９２；４２．０８；３９．５６；２７．９６；２３．７１．
３１Ｐ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：２０（１Ｐ），１８（２Ｐ）．
ＨＲＭＳ（ＥＳ）（ｍ／ｚ）：〔Ｍ＋Ｈ〕— Ｃ２０Ｈ３８Ｃｌ２Ｎ３Ｏ１１Ｐ３の計算値６５８．１０１８，実測値６５８．１０１８．]
[0083] １．４．本発明の単純化分子の合成
分子１：



コンデンサーおよび磁気攪拌器を装備した氷浴（０℃）で冷却されたフラスコ中において、不活性雰囲気下、４８４ｍｇのヘキサメチルジシラザン（３ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）を１０ｍＬの無水ＴＨＦ中で溶液にする。０℃で２．０ｍＬのｎＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ）の添加後１０分間で、１．２ｅｑ．のこの溶液を、１０ｍＬの無水ＴＨＦ中に溶液で３２４ｍｇのベンジルアルコール（３ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）を含有するフラスコ中へ、カニュレーションにより移す。０℃で１０分間後、こうして形成されたアルコラートを、２０ｍＬの無水ＴＨＦに溶解された７７７ｍｇのジクロロ‐Ｎ，Ｎ‐ビス（２‐クロロエチル）ホスホルアミド（３ｍｍｏｌ，１ｅｑ．）を含有するフラスコ中へ、カニュレーションにより移す。攪拌を０℃で２時間続ける。−７８℃で冷却後、反応媒体をアンモニアガス吹込みに３０分間付す。溶媒の減圧下蒸発前に、溶液中溶解アンモニアの脱気をＲＴで３０分間行う。生成物をシリカゲルカラムでクロマトグラフィー（溶離液：ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ＝９８：２）により直接精製する。冷却条件（フリーザー）下で結晶化する透明油状物をこうして得る（３１２ｍｇ，収率＝３４％）。生成物をイソプロピルエーテルから再結晶化する。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．３４（ｓ，５Ｈ）；５．０８‐４．９７（ｍ，２Ｈ）；３．６７‐３．５６（ｍ，４Ｈ）；３．４９‐３．３５（ｍ，４Ｈ）；２．８９（ｓ，２Ｈ，ＮＨ２）．]
[0084] 分子２：



この分子は、３‐（３‐ブロモプロポキシ）ベンジルアルコールから、分子３について記載された合成操作に従い製造した。シリカゲルカラムでクロマトグラフィー（溶離液、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ ９９：１）による精製後、望ましい生成物を６６％の収率で単離する。
Ｒｆ＝０．１５（溶離液ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ ９９：１）．
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．２９（ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）；６．９６（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）；６．９４（ｓ，１Ｈ）；６．８７（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）；５．０７‐４．９３（ｍ，２Ｈ）；４．１２（ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ）；３．６５‐３．５９（ｍ，６Ｈ）；３．４８‐３．３９（ｍ，４Ｈ）；２．７１（ｓ，２Ｈ）；２．３２（ｍ，Ｊ＝６Ｈｚ，２Ｈ）．
３１Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１５．８５（ｓ）．]
[0085] 分子３：



ＮａＨＭＤＳの溶液（ＴＨＦ中２Ｍ，１．１２ｍＬ，２．２２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）中３‐〔〔３‐〔３‐（ヒドロキシメチル）フェノキシ〕プロピル〕（メチル）アミノ〕プロパン酸tert‐ブチル（６００ｍｇ，１．８６ｍｍｏｌ）の溶液へアルゴン下−７８℃で加える。−７８℃で５分間の攪拌後、反応媒体をＲＴで１５分間攪拌し、再び−７８℃に冷却する。この温度で、無水ＴＨＦ（３ｍＬ）の溶液中ジクロロ‐Ｎ，Ｎ‐ビス（２‐クロロエチル）ホスホルアミド（４８０ｍｇ，１．８６ｍｍｏｌ）を滴下し、温度を室温までゆっくり上昇させながら、反応媒体を４時間攪拌して、不溶性物質を出現させる。反応混合液を再び−５０℃に冷却し、アンモニア溶液（ＤＣＭ中１Ｍ，６ｍＬ，６ｍｍｏｌ）を加える。ＲＴで２時間攪拌後、ＤＣＭ（１２０ｍＬ）を加え、溶媒を減圧下で蒸発させる。シリカゲルでクロマトグラフィー後（溶離液：ＤＣＭ、次いでＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝５：１）、予想された生成物を無色油状物として得る（５９８ｍｇ，収率＝６０％）。
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．２３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ）；６．９４‐６．７７（２Ｈ，ｍ）；５．０６‐４．８２（２Ｈ，ｍ），；３．９７（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ）；３．６５‐３．５０（４Ｈ，ｍ）；３．９６‐３．２７（４Ｈ，ｍ）；２．８７（２Ｈ，ｂｒ ｓ）；２．６５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ）；２．４９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ）；２．３５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ）；２．２１（３Ｈ，ｓ）；１．９０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７Ｈｚ）；１．４０（９Ｈ，ｓ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１７２．１６；１５９．４０；１３８．０９（ｄ，３Ｊｃ‐ｐ＝７Ｈｚ）；１２９．８４；１１９．９７；１１４．６１；１１３．９５；８０．５１；６７．２０（ｄ，２Ｊｃ‐ｐ＝５Ｈｚ）；６６．２６；５４．１０；５３．１５；４９．４０（ｄ，２Ｊｃ‐ｐ＝５Ｈｚ）；４２．７３；４２．１３；３３．８５；２８．２７；２７．３１．
３１Ｐ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１６．]
[0086] 分子４：



カテコールボランの溶液（ＴＨＦ中１Ｍ，２．１ｅｑ．）をアルゴン下、ＲＴで３‐〔メチル‐（３‐フェノキシプロピル）アミノ〕プロパン酸（１ｅｑ．）へ加える。この混合液をガス発生（Ｈ２）の終了まで同温度で１時間攪拌する。次いでＰ（ＯＳｉＭｅ３）３（３．１ｅｑ．）をそのまま加え、攪拌を１６時間続ける。メタノール（２ｍＬ）を加え、反応混合液を１時間攪拌し、真空下で乾燥蒸発させ、最少量のメタノールに溶解し、ジエチルエーテル（３０ｍＬ）で希釈する。白色沈殿物が生成する。後者を分離し、ジエチルエーテルで速やかにすすぎ、アルゴン下で乾燥させる。白色粉末をこうして８５％の収率で得る。
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ‐ｄ６，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．３０‐７．１５（２Ｈ，ｍ）；７．２３（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ）；６．９７‐６．８０（３Ｈ，ｍ）；３．９９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ）；３．５５‐３．００（４Ｈ，ｍ）；２．７４（３Ｈ，ｓ）；２．３５‐１．９５（４Ｈ，ｍ）．
１３Ｃ ＮＭＲ（ＣＤ３ＣＯＤ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１５８．８７；１３０．１６；１２１．６４；１１５．１８；７２．３３（ｔ，１Ｊｃ‐ｐ＝１３６Ｈｚ）；６５．５１；５４．３１；５３．３７；４０．３７；２８．２８；２４．４４．
３１Ｐ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ‐ｄ６，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１９．]
[0087] ２．生物学的試験
２．１．抗腫瘍活性を有する分子
・本発明の「単純化分子」について表す以下の３分子を、それらの抗腫瘍活性について試験した：]
[0088] インビトロ試験：
腫瘍細胞系（ＰＯＳ‐１マウス骨肉腫）および高増殖率の非腫瘍細胞系（ネズミ線維芽細胞Ｌ９２９）で並行して研究を行った。試験すべき分子１〜３の存在下において、溶媒としてＤＭＳＯまたはエタノール（ウェル中最終１％）を用いることにより、７２時間にわたり９６ウェルプレートで細胞を培養した。]
[0089] 下記表は、異なる分子および細胞系で得られた結果（測定ＩＣ５０の値）を示している。]
[0090] ]
[0091] これらの結果は、分子のホスホロジアミドアルキル化部分による、分子２および３の細胞増殖に及ぼす阻害活性を示している。]
[0092] インビボ試験：
Ｃ３Ｈ／ＨｅＮ株の５週齢雄性マウスに静脈内経路から後眼窩洞へＰＯＳ‐１マウス骨肉腫の１５０，０００細胞を各々投与し、４〜６週間以内で肺結節の成長を誘導させる。]
[0093] これらのマウスを次いで、骨肉腫腫瘍細胞の注入後７日目に、分子１または分子２（１１２μｍｏｌ／ｋｇ）の注射で処置した。]
[0094] 図１で示された生存率の結果は、いかなる処置も受けなかったコントロールマウス（図１で菱形のＣＴ曲線）と比較して、分子１および分子２により処置されたマウス（各々、図１で四角および三角の曲線）においては、腫瘍細胞の注入後４０日目に早くもこの生存率の有意な増加を示している。したがって、分子１および分子２は肺結節のこのモデルで抗腫瘍活性を実際に有する。] 図１
[0095] 両試験は更に、ここではホスホロジアミドタイプのアルキル化活性成分である残基Ｒ２が放出されたが、そうでなければアルキル化剤、ひいては抗腫瘍剤の役割を果たせなかったであろう、ということを示している。したがってこれは、ｍ＝１およびＸ＝０である場合、分子がさほど安定でなく、活性成分を放出することが可能であることを示している。]
[0096] ・本発明による分子(III)および（IV）もそれらの抗腫瘍活性について試験した。]
[0097] インビトロ試験：
分子(III)および（IV）の生物学的活性（生存力／細胞毒性試験）を、正常細胞（マウス頭蓋冠健常骨芽細胞）と比較して、ヒト、ネズミ、およびラット骨肉腫系の培養物においてインビトロで試験した。]
[0098] インビトロで得られた結果は、本化合物の死誘導、ひいては細胞毒性活性のために、試験化合物の増殖阻害活性を証明していた。細胞毒性活性はマウス頭蓋冠の一次培養物からの健常骨芽細胞で観察されず、そのためこれらの化合物に対して正常骨芽細胞が反応性を有さないことを証明した。]
[0099] 下記表は、３種のヒト（ＭＧ６３）、マウス（ＰＯＳ１）、およびラット（ＯＳＲＧＡ）骨肉腫細胞系で得られた結果（測定ＩＣ５０の値）を示す。]
[0100] ]
[0101] インビボ試験：
マウス骨肉腫ＰＯＳ１細胞をＣ３Ｈ／ＨｅＮ株の５週齢雄性マウスの足蹠に注入した。溶骨原始骨腫瘍の成長を誘導するために、この部位で成長する腫瘍のフラグメントを傍骨部位へ移植する。次いで腫瘍誘導後７日目（Ｄ７）から２４時間間隔で１１．５または１１５μｍｏｌ／ｋｇの３回非経口内（intraparenteral）注射（ＩＰ）の療法として分子（IV）を注射した。]
[0102] 得られた結果は、注射された全体の化合物がＸ線写真像をみてわかるように骨付加成長を増すことで骨組織と実際に結合し（図３参照）、同時に抗腫瘍ドメインを放出することにより腫瘍容積（骨外部位）の減少を誘導し（図４参照）、同様の結果（腫瘍容積の−２０〜−３０％減少）が両濃度で得られたことを証明している。] 図３ 図４
[0103] ２．２．強い骨指向性の分子
この研究は、本発明の「単純化分子」を表し、下記分子４を用いることにより行った：



インビボ試験：
２〜３週齢の若いマウス（Swiss株）を、０．３５μｍｏｌ／ｋｇの濃度で、週２回皮下により分子４またはゾレドロン酸の二ナトリウム塩（ＰＢＳで希釈）で処置した。]
[0104] ゾレドロン酸の二ナトリウム塩は、ここでは比較分子として用いられる、第三世代ビスホスホネートである。]
[0105] ４週間の処置後、これら二分子の一つで処置されたマウスの体重追跡にも、または全身状態にも影響がないことがわかった。図２で示されたＸ線写真は、「コントロール」マウスと比較して、ゾレドロン酸の二ナトリウム塩または分子４で４週間の処置後に、鉱質密度の増加を表している。更に、測定された比骨容積（ＢＶ／ＴＶ＝分析組織の総容積をベースにした骨の容積）が、上記操作に従う分子４またはゾレドロン酸の二ナトリウム塩の投与の場合、あるいは処置の非存在の場合（コントロール値）について、下記表に示される。] 図２
[0106] ]
[0107] これらの結果は、分子４が、対照品、ゾレドロン酸の二ナトリウム塩で得られた値と匹敵するほど、この分子で処置されたマウスにおいて大腿骨の総比骨容積で増加を誘導しうることを示している。]
[0108] ２．３．蛍光分子
分子（II）を異なる細胞系においてインビトロで試験したが、いかなる細胞毒性活性も有していなかった。マウスへの投与でも、細胞毒性活性を何ら示さなかった。]
[0109] 分子（II）は光エネルギー（励起波長λ：２８０ｎｍ）を吸収して、蛍光としてそれを速やかに放出する特性を有している。そのため、分子（II）の放出スペクトルは、２８０ｎｍで励起後に、この分子が５００ｎｍの波長で光を再放出することを示している。]

权利要求:

請求項1
下記一般式（Ｉ）で表されるヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体またはその薬学上許容される塩：（上記式中、‐ｎおよびｍは、互いに独立して、１〜４を範囲とする整数を表し、‐Ｘは酸素原子またはＮ‐Ｒ３基を表し、‐Ｒ１およびＲ３は、互いに独立して、直鎖状または分岐状Ｃ１‐Ｃ６アルキル基を表し、並びに‐Ｒ２は治療または診断に関係する分子の残基を表す）。
請求項2
Ｒ２が、蛍光分子の残基、例えば（５‐ジメチルアミノ）ナフタレン‐１‐スルホニル残基、７‐ニトロ‐１，２，３‐ベンゾオキサジアゾール残基、もしくはフルオレセイン、または発光分子、例えばジオキセタン誘導体である、請求項１に記載のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体。
請求項3
Ｒ２が、溶骨または骨凝縮骨リモデリングの病態、例えば原始骨腫瘍、例えば骨肉腫、軟骨肉腫、巨細胞腫、またはユーイング肉腫、骨転移、多発性骨髄腫、リン‐カルシウム代謝の脱調節、例えば高カルシウム血症、骨粗鬆症、および炎症病態、例えばリウマチ様関節炎または周囲プロテーゼ弛緩の治療または診断に有用な活性成分の残基である、請求項１に記載のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体。
請求項4
Ｒ２が、標準化学療法剤、例えばイホスファミド、シスプラチナム、またはドキソルビシンの誘導体、抗炎症剤、例えばコルチコステロイド、例えばデキサメタゾンまたは非ステロイド系抗炎症剤、例えばイブプロフェン、および骨前形成または抗吸収活性のあるペプチドから選択される活性成分の残基である、請求項１および３のいずれか一項に記載のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体。
請求項5
下記化合物から選択される、請求項１に記載のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体：
請求項6
薬剤または診断剤としてその使用のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体またはその薬学上許容される塩。
請求項7
骨組織を画像化するために、あるいは溶骨または骨凝縮骨リモデリングの病態、例えば原始骨腫瘍、例えば骨肉腫、軟骨肉腫、巨細胞腫、またはユーイング肉腫、骨転移、多発性骨髄腫、リン‐カルシウム代謝の脱調節、例えば高カルシウム血症、骨粗鬆症、および炎症病態、例えばリウマチ様関節炎または周囲プロテーゼ弛緩の治療または診断のために有用である、請求項６に記載のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体。
請求項8
基Ｒ２の放出性を確保するために、ｍが１であり、Ｘ＝０である、請求項６または７に記載のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体。
請求項9
基Ｒ２の持続性を確保するために、ｍが２以上である、請求項６または７に記載のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体。
請求項10
請求項１〜５のいずれか一項に記載の少なくとも一種のヒドロキシ‐ビスホスホン酸誘導体またはその薬学上許容される塩と、少なくとも一種の薬学上許容される担体とを含んでなる、医薬または診断用組成物。
請求項11
注射溶液としてまたはパッチとして製品化される、請求項１０に記載の医薬または診断用組成物。
請求項12
薬剤または診断剤としての使用のための、請求項１０または１１に記載の医薬または診断用組成物。
請求項13
骨組織を画像化するために、あるいは溶骨または骨凝縮骨リモデリングの病態、例えば原始骨腫瘍、例えば骨肉腫、軟骨肉腫、巨細胞腫またはユーイング肉腫、骨転移、多発性骨髄腫、リン‐カルシウム代謝の脱調節、例えば高カルシウム血症、骨粗鬆症、および炎症病態、例えばリウマチ様関節炎または周囲プロテーゼ弛緩の治療または診断のために有用である、請求項１２に記載の医薬または診断用組成物。
請求項14
皮下、静脈内、経口、筋肉内、または経皮経路により投与を行えるように処方される、請求項１２または１３に記載の医薬または診断用組成物。
請求項15
下記の連続工程：（ａ）下記式（Ｂ）の化合物：（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、ｎ、およびｍは請求項１において定義された通りであり、Ａｌｋは先に定義された通りである）を得るために、下記式（Ａ）の化合物：（上記式中、Ｒ１、Ｘ、ｎ、およびｍは請求項１において定義された通りであり、Ａｌｋは直鎖状または分岐状Ｃ１‐Ｃ６アルキル基、特にtert‐ブチル基を表す）と、請求項１において定義されているような残基Ｒ２に相当する治療または診断に関係する分子とのカップリング、（ｂ）下記式（Ｃ）の化合物：（上記式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、ｎ、およびｍは請求項１において定義された通りである）を得るために、前工程（ａ）において得られた式（Ｂ）の化合物の末端エステルのケン化、（ｃ）式（Ｉ）の化合物を得るために、前工程において得られた式（Ｃ）の化合物の遊離カルボン酸官能基からヒドロキシ‐ビスホスホン酸官能基への変換、（ｄ）場合により、薬学上許容される塩を得るために、前工程（ｃ）において得られた式（Ｉ）の化合物の塩化、および（ｅ）前工程（ｃ）または（ｄ）において得られた式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の一種の反応媒体からの分離を含んでなる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬学上許容される塩の一種の製造方法。